1992年,美国的国际权威科学刊物《Science》对中国学者韦忠民博士在康乃尔大学工作期间关于植物病原细菌诱导植物过敏反应的激发子Harpin的科研成果做了突出报导,因首次揭示了植物是如何识别病原菌的侵染并做出反应、诱导产生系统获得抗性的奥秘,被认为是科学上的重大突破,得到美国政府的特别资助。
韦忠民博士与伊甸生物技术公司的专家们共同努力,将这种由植物病原细菌产生的蛋白激发子开发成一种对环境友好、对人畜安全的农用生物技术产品——康壮素(在美国商品名叫Messenger〈意思是信使〉),剂型为3%微颗粒剂。2000年在美国获得登记,被EPA列为免检残留的农药产品,准许在所有作物上使用。2001年,再次荣获美国总统颁发的“绿色化学挑战奖”,并被称为是“植物保护和农产品安全生产上的一次绿色革命”。现已在美国、墨西哥、西班牙等国的烟草、蔬菜和水果上广泛应用。
2001年经我国农业部农药检定所(ICAMA)审定通过取得了农药临时登记证,证号为:LS200160。首批推荐在番茄、辣椒、烟草和油菜上使用。由于其独特的作用机理和明显的防病、抗虫、增产效果,受到我国专家、学者的广泛关注。
一、康壮素的特点
康壮素的有效成分是一种超敏蛋白,化学通用名为HarpinEa,由403个氨基酸组成,分子量约44 KD,富含甘氨酸(占21%),不含半胱氨酸。基因序列的登录号为AAC 31644。其主要特点为:
1.促进根系生长
使用康壮素后,植物根部发达,毛根、须根增多,干物质、吸肥量特别是吸钾(K)量明显增加。这不仅有利于植物地上部分的生长,而且还可以提高作物对干旱、低温、早霜等一些短期不良环境因子的忍受和忍耐力,还可增强对包括线虫在内的土传病害的抵抗力。
2.促进茎叶生长
使用康壮素后,植物普遍表现茎节粗壮,叶片肥大,色泽鲜亮,长势旺盛,植物健壮。云南省农科院植保所2001年在烟草上试验,用康壮素15~30mg/kg处理3次,株高比对照增长1.1%~2.8%,茎围增长2%~2.9%,最大叶面积增加57.95~116.29cm2。
3.促进果实生长
使用康壮素后,茄果类蔬菜的坐果率普遍提高,单果增大增重,果实个体匀称整齐。
2003年寿光市留吕镇留吕村的蔬菜种植户孙荣祥在自家的西红柿拱棚内于5月10日、6月1日用了2次30mg/kg的康壮素,6月16日调查,与未用的相比叶片紧凑,叶色绿,叶面舒展,叶肉厚,株高增加5.7%,坐果率提高4.7%,单果质量120g,增加6.2%,而且果个匀称,成熟果色泽亮丽,单株增产21.5%。
4.增强光合作用活性,提高光合速率和效率
美国伊甸公司的研究人员用Li-CorLI6400光合仪对试验作物进行测定,经康壮素处理的芦笋的光合速率比未经处理的高62.4%,番茄使用康壮素处理1天的光合效率提高19.8%,4d提高25.4%。研究结果认为,使用1次康壮素后最少有4d的光合速率高于基础水平。
5.加快植物生长发育进程,促进作物提前开花和成熟
上海市园林研究所1999-2000年在瓜叶菊上试验,发现经康壮素处理的比未经处理的提前7~10d开花。根据美国的生产应用实践,伊甸公司特意提醒番茄种植户应提前1~2周做好收获前的相关准备。
6.诱导抗病效果良好
南京农业大学王金生教授1997年以来将康壮素在国内40多种作物上安排了250多项田间试验,结果表明康壮素对约60种病害都具有不同程度的抗病作用。对辣椒病毒病诱抗效果达40.7%~63.3%,最高达96.9%;对番茄叶霉病诱抗效果达70.1%;对草莓灰霉病诱抗效果达61.2%;对黄瓜白粉病诱抗效果达66.1%;对黄瓜霜霉病诱抗效果达56.4%;对小麦蚜虫可减轻危害84.9%;对水稻二化螟亦可减轻危害43%;对油菜菌核病的诱抗防效为58.2%~73.69%;对烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)效果好而且稳定。温室内的诱抗效果可达70%左右。为此,伊甸公司将对烟草花叶病毒(TMV)诱抗60%作为检测HarpinEa超敏蛋白活性合格或者不合格的重要标志。
7.减轻采后病害危害,延长农产品货架保鲜期
HarpinEa超敏蛋白不仅在作物生长期有诱导抗病的功能,而且对减轻采后病害的发生也有明显作用。
伊甸公司将采收后的番茄用15mg/kg康壮素和缓冲液5mmolkpO4处理,1周后用灰霉菌(Botrytis Cinerea)的孢子悬浮液(含量为105孢子/mL)对果面进行接种,存放在18℃条件下,20d左右调查。番茄处理后的病情指数比未处理的对照组减少44%。
8.改善品质,提高商品等级,增产增收
湖南省农科院植保所2000年在辣椒上进行试验,并对内在品质进行了分析,用康壮素30mg/kg处理2次后的小区比清水对照小区的干物质含量增加29.4%,辣椒素含量增加11.6%,Vc含量增加48.9%,产量提高63.25%。
二、机理独特
HarpinEa的作用机理与常用农药相比,主要有两点显著区别:(一)对病原生物和害虫没有毒性,不能直接杀菌防病和杀虫,而是靠提高植物自身的免疫力和植株的素质抵御病虫危害和其他不良环境的影响。(二)不是激素,也不含激素,但是有激素的作用。是作为一种信号物质和植物表面受体接触后所产生的信号传入植物体内起生长调节作用的。
科学研究表明,HarpinEa是一种革兰氏阴性细菌hrp基因编码的蛋白质激发子(即一种能诱导植物产生防卫反应,增强植物生长发育功能的特殊化合物),只起第一信使的作用,只要与植物表面的信号接受器(又称受体)接触,即一触即发,发挥作用。目前,伊甸公司的科学家们已证实了植物表面普遍存在这种受体。该受体含284个氨基酸,分子量约30KD。当HarpinEa喷洒到植物表面时,会很快被植物表面细胞上一种特异蛋白受体HrBP1识别接收,随即产生第二信使,活化植物的信号传导系统。这种信号通过细胞内和细胞间的连续传递,使转录和翻译不断增强,从而激活植物多种防卫基因表达,合成抗病相关酶类,包括病程相关蛋白和有利于植物健康生长的生物活性物质,最终表现出抵御病原物和一些害虫的侵染和侵袭,使植物呈现出抗击病虫侵害的能力和减轻病虫危害的生物效应。同时,还通过对植物生长发育相关调节因子的激活和复杂的生理生化活动的调整,增强了植物健壮生长发育的机能。
伊甸公司的研究人员还进一步发现,HarpinEa通过HrBP1最少可以打通植物体内4条信号传导通路。
第一条是学者们熟知的水杨酸(SA)介导的传导途径。这条传导途径的主要作用是使植物产生对多种病害的过敏反应(HR)和系统获得抗性(SAL)以及诱导开花,生热抗低温等。他们的研究还证明Harpin能诱导植物抗病必需的Eds5和npr1基因表达,从而使植物体内的水杨酸(SA)、活性氧(H2O2)和病程相关蛋白(PR_1、PR_2)等的高水平积累。
第二条是茉莉酸(JA)介导的传导途径。
第三条是乙烯(ETH)介导的传导途径。茉莉酸和乙烯是植物信号传导不可缺少的物质。这两条信号传导途径的开通已证明有利于提高植物的抗病、抗虫、抗逆胜,并可调节植物的生长发育。茉莉酸能促进生根,增加不定根干重;提高水稻幼苗对低温(5~7℃,3d)和高温(46℃,24h)的抵抗力。乙烯除了诱导抗病、抗虫性外,主要的生理效应是促进成熟,促进开花,促进根的生长、分化和不定根的形成等。Harpin通过对这两条信号传导途径的诱导,可以使JAR1,和EIN2正常表达,从而使两个标志防卫基因产物PDF1.2和Thi2.1积累。这两种产物是富含半胱酸的小分子量抗菌蛋白。
第四条信号传导途径又是伊甸公司研究人员的新发现。该传导途径主要是增强对病原细菌的抗性。对其具体机制仍在研究当中。
HarpinEa为什么能诱导植物对几十种病害和部分虫害表现出不同程度的抗性和健壮生长这么多的效应?主要原因:一方面是因为HarpinEa是一种非特异性激发子,多种植物都存在有接受它的信号的受体。另一方面是,所诱发的信号能够活化疏通多种信号传导系统,从而诱导植物产生广谱性诱导抗病性和促进生长及增产的生理效应。
三、微毒安全
康壮素为天然生物蛋白质制品,雌雄大白鼠经口LD50>5 000 mg/kg,经皮LD50>6 000 mg/kg,美国EPA(环保局)定为微毒农药,对人体无害,对作物、环境、天敌安全。喷到植物表面上的HarpinEa,在被受体蛋白 HrBP1识别接收后,即完成作为第一信使的使命,其蛋白体3~4d即会自然降解,没有残留,因此被美国EPA列为免检残留的农药产品。
四、使用方便
一般每667 m2用15g,对水15~30kg,在作物苗期或移栽前,初花期,幼果期到收获前,每隔15~20d均匀喷洒1次,共喷3~5次。美国最多喷10次以上,各地可根据特色果、菜、烟、茶、药材、花卉市场的经济效益、投入产出比和应用经验适当予以增减。Harpin超敏蛋白的活性易受氯气、强酸、强碱、强氧化剂、离子态药肥、强紫外线等的影响,使用时应加以注意,以确保其活性和效果。